動物源性食品中喹諾酮類藥物殘留LC-MS/MS分析方法
背景
喹諾酮類（Quinolones, QNs）是人工合成的一類抗菌藥物，因其具有抗菌譜廣、高效、低毒、組織穿透力強、價格低廉等特點，已成為食品動物飼養(yǎng)和水產養(yǎng)殖中最重要的抗感染藥物之一，但由于細菌對喹諾酮類藥物耐藥性的產生和某些喹諾酮類藥物的潛在致癌作用，其殘留問題已引起廣泛關注。
2003 年我國的鰻魚產品就曾因氟喹諾酮類藥物殘留問題出口日本受阻。目前，包括我國在內的許多國家和地區(qū)都對喹諾酮類藥物的使用范圍和最大殘留限量做出規(guī)定。歐盟規(guī)定動物肌肉等組織中恩諾沙星等的MRLs 為0.01 ～ 1.9 mg/kg；美國禁止在水產養(yǎng)殖業(yè)中使用QNs；日本對進口生鰻魚及其制品的環(huán)丙沙星等殘留限量控制在檢測限的0.05 mg/kg。中華人民共和國農業(yè)部公告第2292 號，自2016 年12 月31 日起，停止經(jīng)營、使用用于食品動物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4 種原料藥的各種鹽、酯及其各種制劑。本文根據(jù)《GB/T20366-2006 動物源產品中喹諾酮類殘留量的測定液相色譜- 串聯(lián)質譜法》，采用PerkinElmer QSight LCMSMS 建立動物源食品中喹諾酮類藥物殘留的解決方案。
樣品前處理方法
提取
稱取5.0 g 試樣，置于50 mL 聚四氟乙烯離心管中，加入20 mL 甲酸- 乙腈溶液（1:49），均質1 min，以4000 r/min 離心5 min。上清液移入另一個50 mL聚四氟乙烯離心管中。將離心殘渣用20mL 甲酸- 乙腈溶液再提取一次，合并上清液。
凈化
將上清液轉移至125 mL 分液漏斗中，加入25 mL乙腈飽和的正己烷，振搖2 min，將下層溶液轉移至100 mL 棕色雞心瓶中，于40 ℃水浴中旋蒸至近干，氮吹至干。準確加入1.0 mL 甲酸- 乙腈溶液溶解殘渣，渦流混勻后，過濾至樣品瓶中，供LC-MS/MS 測定。
LC-MS/MS 方法
液相色譜參數(shù)
色譜柱：Brownlee SPP C18，100 mm*2.1 mm，2.7μm （貨號：N9308404）
柱溫：35 ℃
流動相：A：乙腈，B：水（含0.1 % 甲酸，2.0 mM 乙酸銨）
流速：0.4 mL/min
運行時間：10 min
梯度洗脫：洗脫程序見表1：
質譜參數(shù)
以下參數(shù)以PerkinElmerQSight 200 系列為例，喹諾酮類化合物質譜參數(shù)見表2。
離子源質譜參數(shù)：
離子源模式：電噴霧離子源，正離子模式（ESI+）
反吹氣：75
霧化氣：220
離子源溫度：450 ℃
離子源噴霧電壓：5000 V
實驗結果
各組分的色譜圖如圖1 所示，各個化合物均獲得良好的色譜分離
十六種喹諾酮類化合物的標準曲線線性見表3，氟甲喹標準工作曲線的濃度梯度為：0.001，0.002，0.005，0.1，0.2，0.5，1，2，5，10 ng/mL。圖2 為氟甲喹的標準曲線圖。
其余喹諾酮目標化合物的標準曲線在0.01-50 ng/mL，依次為0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0，50.0 ng/mL。其中，諾氟沙星和環(huán)丙沙星為0.05-50 ng/mL，萘啶酸和氟甲喹為0.001-10 ng/mL。標準曲線范圍內具有良好的線性（R2> 0.994）；采用魚肉基質作為加標樣品，平行6 個樣品測試方法的回收率和方法重現(xiàn)性，詳細結果請見表4。從表4 可以看到，在加標濃度為2 ng/mL 下，回收率為92.25-105.87 %，方法重現(xiàn)性為1.53-4.78%。最低定量限為0.0002-0.01μg/kg，完全符合殘留檢測要求。
結論
本方法完全滿足對GB/T 20366-2006 動物源產品中喹諾酮類殘留量的檢測要求（標準里的最低限量為1.0μg/kg），適用于喹諾酮及其類似物的日常檢測。PerkinElmerQSight 210TM 系統(tǒng)完全滿足動物源產品中喹諾酮類殘留量的日常檢測工作。該質譜系統(tǒng)離子源具有自清潔功能以及質譜接口HSID 熱源去溶劑技術，提高儀器抗污染能力，從而獲得更低的噪音，更低的檢測限，從容應對復雜基質的食品安全檢測。
參考文獻
1. GB/T 20366-2006 動物源產品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜- 串聯(lián)質譜法
色譜柱及標準品訂購信息
PerkinElmer SPP 系列色譜柱訂購信息：色譜柱采購直線：
021-60645658，021-60645659
電子郵件：consumable.china@perkinelmer.com。
標準品訂購信息：
1ST9243-100M | 16 種喹諾酮類混標溶液，100ppm |
組分 | |
產品號 | 中文 | 英文 | CAS# | MF |
1ST4100 | 達氟沙星 | Danofloxacin | 112398-08-0 | C19H20FN3O3 |
1ST4107 | 恩諾沙星 | Enrofloxacin | 93106-60-6 | C19H22FN3O3 |
1ST5703 | 環(huán)丙沙星 | Ciprofloxacin | 85721-33-1 | C17H18FN3O3 |
1ST5714 | 依諾沙星 | Enoxacin | 74011-58-8 | C15H17FN4O3 |
1ST5719 | 氟羅沙星 | Fleroxacin | 79660-72-3 | C17H18F3N3O3 |
1ST5735 | 萘啶酸 | Nalidixic acid | 389-08-2 | C12H12N2O3 |
1ST5738 | 諾氟沙星 | Norfloxacin | 70458-96-7 | C16H18FN3O3 |
1ST5740 | 氧氟沙星 | Ofloxacin | 82419-36-1 | C18H20FN3O4 |
1ST5743 | 奧比沙星 | Orbifloxacin | 113617-63-3 | C19H20F3N3O3 |
1ST5745 | 惡喹酸 | Oxolinic acid | 14698-29-4 | C13H11NO5 |
1ST5753 | 司帕沙星 | Sparfloxacin | 110871-86-8 | C19H22F2N4O3 |
1ST5756 | 培氟沙星 | Pefloxacin | 70458-92-3 | C17H20FN3O3 |
1ST5757 | 沙拉沙星 | Sarafloxacin | 98105-99-8 | C20H17F2N3O3 |
1ST5758 | 雙氟沙星 | Difloxacin | 98106-17-3 | C21H19F2N3O3 |
1ST5761 | 氟甲喹 | Flumequine | 42835-25-6 | C14H12FNO3 |
1ST5759 | 洛美沙星 | Lomefloxacin | 98079-51-7 | C17H19F2N3O3 |
