案例來源：博納艾杰爾

核苷酸是生命遺傳物質(zhì)RNA的基本組成單位，是體內(nèi)合成核酸的前身物。嬰幼兒正處在快速生長發(fā)育階段，身體對核苷酸的需求量超過體內(nèi)合成核苷酸的能力，但母乳可為嬰幼兒提供所需核苷酸。而對于沒有母乳喂養(yǎng)的嬰幼兒，食用含足量核苷酸的配方奶粉，不僅可提高免疫力，也可保護(hù)嬰幼兒腸胃健康。

實(shí)驗(yàn)部分

儀器、試劑與材料

主要儀器設(shè)備

高效液相色譜儀，紫外檢測器；

試劑材料

屈臣氏水；甲醇為色譜純；磷酸二氫鉀色譜純；磷酸、四丁基硫酸氫銨為分析純；

胞嘧啶核苷酸（胞苷酸）、腺嘌呤核苷酸（腺苷酸）、尿嘧啶核苷酸（尿苷酸）、次黃嘌呤核苷酸、鳥嘌呤核苷酸（鳥苷酸）標(biāo)準(zhǔn)品；

高效液相色譜柱：Venusil ® C18 Plus；5μm，120?，4.6×250mm

樣品制備

5種核苷酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別稱取核苷酸標(biāo)準(zhǔn)品CMP、AMP、UMP各10mg、GMP、IMP各5mg(精確至0.1mg)，用水溶解成并定容至100mL，混勻，即得；

某品牌嬰幼兒奶粉樣品溶液：稱取5.0g奶粉樣品，用20mL熱水(50~60℃)充分溶解試樣，冷卻至室溫；用10%乙酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.1，移至50mL容量瓶中，定容，濾紙過濾，所得濾液用0.45μm濾膜過濾，即得樣品溶液。

色譜條件

色譜柱：

Venusil ® C18 Plus；5μm，120?，4.6×250mm；

流動(dòng)相：

稱取1.360g磷酸二氫鉀，加0.4753g四丁基硫酸氫銨至1000mL容量瓶中，用水補(bǔ)齊至刻度，準(zhǔn)確加2.5ml磷酸和40mL甲醇，混勻后超聲10min。（備注：由于流動(dòng)相中含離子對試劑，色譜柱需要先用流動(dòng)相平衡至少90min后，再運(yùn)行4針標(biāo)準(zhǔn)品，系統(tǒng)才能穩(wěn)定）

波長：254nm；

柱溫：30℃；

流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量：10μL。

結(jié)果與討論

本實(shí)驗(yàn)按照GB5413.40-2016嬰幼兒食品和乳品中核苷酸的測定中方法，使用Venusil® C18 Plus色譜柱對5種核苷酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、嬰幼兒奶粉樣品溶液進(jìn)行檢測，由以下結(jié)果可知，嬰幼兒奶粉樣品中五種核苷酸與雜質(zhì)的分離度大于1.5，回收率97%~109%，滿足實(shí)驗(yàn)需求。

 表2.5種核苷酸實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

樣品名稱	化合物名稱	保留時(shí)間/min	理論塔板數(shù)	分離度	拖尾因子	備注
5種核苷酸混標(biāo)	CMP	3.660	15803	—	0.98	圖1
	AMP	5.608	16882	13.46	0.97
	GMP	11.061	18806	21.99	0.96
	UMP	21.226	21178	22.40	0.98
	IMP	26.011	20584	7.30	0.99

圖1.Venusil ® C18 Plus色譜柱5種核苷酸混標(biāo)高效液相色譜圖

 表3.某品牌嬰幼兒奶粉5種核苷酸實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

化合物名稱	保留時(shí)間/min	分離度	拖尾因子	備注
CMP	3.659	—	0.99	圖2
雜質(zhì)1	4.342	5.73	-
AMP	5.605	8.48	0.94
雜質(zhì)2	6.081	2.74	-
GMP	11.051	18.91	0.97
雜質(zhì)3	19.841	20.47	-
UMP	21.223	2.57	0.95
IMP	26.015	7.30	0.99

圖2.Venusil® C18 Plus色譜柱嬰幼兒奶粉樣品溶液高效液相色譜圖

表4.某品牌嬰幼兒奶粉5種核苷酸加標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

化合物名稱	保留時(shí)間/min	加標(biāo)濃度（ug/mL）	回收率（%）	備注
CMP	3.660	12.2	108.4	圖3
AMP	5.605	7.6	101.8
GMP	11.050	9.2	97.7
UMP	21.213	14.8	106.3
IMP	26.028	11	101.9

圖3.Venusil ®C18 Plus色譜柱嬰幼兒奶粉樣品加標(biāo)溶液高效液相色譜圖

結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)按照GB5413.40-2016嬰幼兒食品和乳品中核苷酸的測定中方法，使用Venusil® C18 Plus色譜柱對5種核苷酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液、嬰幼兒奶粉樣品溶液進(jìn)行檢測，結(jié)果表明在上述實(shí)驗(yàn)條件下，Venusil®C18 Plus色譜柱可用于嬰幼兒奶粉中5種核苷酸的分析檢測。

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品

樣品名稱	化合物名稱	保留時(shí)間/min	理論塔板數(shù)	分離度	拖尾因子	備注
5種核苷酸混標(biāo)	CMP	3.66	15803	—	0.98	圖1
	AMP	5.608	16882	13.46	0.97
	GMP	11.061	18806	21.99	0.96
	UMP	21.226	21178	22.4	0.98
	IMP	26.011	20584	7.3	0.99

其他耗材

產(chǎn)品名稱	訂貨號(hào)	規(guī)格描述	包裝數(shù)量
Venusil ®C18 Plus	VPS952505-A	5μm，120?；4.6×250mm	1支
1.5mL樣品瓶	1109-0519	短螺紋透明帶書寫處	100/PK
		32×11.6mm
1.5mL樣品瓶蓋	0915-1819	9mm中心孔藍(lán)蓋，紅色橡膠/米色PTFE隔墊	100/PK
		45 Shore?；1.0mm
微孔濾膜	AS021345-T	單膜，13mm，0.45μm	100個(gè)/包
一次性注射器	LZSQ-2ML	2mL無針頭	100支/包